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快速检测食品菌落方法——菌落总数测试片

发布时间:2013-07-23

  食品菌落检测方法很繁琐,要先取样之后才能进行下一步检测。现在一种快速检测食品菌落总数的方法诞生了,让我们去看看吧。

  菌落总数是指样品经过处理,在一定条件下培养后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数,是最常用的微生物检测项目。菌落总数测试片(FilmplateTMAerobicBB202)是一种预先制备好的一次性培养基产品,含有标准的营养培养基,冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑(TTC),菌落在测试片上呈红色,这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定,也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备表面的菌落总数。执行标准:食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定(GB/T4789.2-2010)。

  使用方法

  1、样品处理:取样品25mL(g)放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液(或生理盐水)的取样罐或均质杯内,制成1:10的样品匀液,必要时用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液调节样品匀液pH至6.6~7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL,注入含有9mL稀释液的试管内,振摇后成为1:100的样品匀液,以此类推,做出1:1000等稀释度的样品匀液,每次换一支吸管。

  2、接种:一般食品选2~3个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如饮用纯水和矿泉水等)可直接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片(BB202)置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置10s左右使培养基凝固,每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。

  3、培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。一般食品培养温度为36℃±1℃,培养15~24h;水产品培养温度为30℃±1℃,培养48h。

  结果判读

  细菌在测试片上生长后会显示红色斑点,选择菌落数适中(30~300个)的测试片进行计数,乘以稀释倍数后即为每毫升(或每克)样品中所含的细菌菌落总数。

  计数原则及报告方式

  1、若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个纸片菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每毫升(或克)样品中菌落总数结果。

  2、若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:

  3、若所有的稀释度菌落总数均大于300CFU,则对稀释度最高的测试片进行计数,其他测试片可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

  4、若所有的稀释度菌落总数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

  5、若所有的稀释度(包括液体样品原液)均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

  6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30CFU~300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于300CFU,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

  7、菌落总数的报告

  a、菌落总数在100CFU以内时,按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字报告。

  b、大于或等于100CFU时,第三位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前两位数字,后面的0代替位数,也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。

  c、若测试片上一片红色无法计数时,则报告多不可计。

  d、若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。

  e、称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。

  表面取样方法

  加1mL灭菌磷酸缓冲液(或生理盐水)在测试片上,至少静置10S,使培养基凝固;提起上层膜,使中央滤纸部分贴到待测物表面,用手在外侧轻压;然后将上盖膜合上,置培养箱内培养。

  附加说明

  1、菌落总数测试片检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达80%以上,山东省疾病预防控制中心进行的验证试验表明,24h计数测试片上菌落数为平板菌落数的87%。

  2、磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌:贮存液:称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中,用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中,121℃高压灭菌15分钟,或者放入消毒碗柜中消毒。

  3、生理盐水的配制与灭菌:取8.5g分析纯氯化钠(NaCl)溶解到1000mL蒸馏水或纯净水中,先煮开后进行分装,取9mL加入到10mL洁净试管中,盖上硅橡胶塞或棉纱塞,放入红外线消毒柜中消毒。

  这种快速检测食品菌落总数的方法简单快速,值得推广。

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