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转基因生物检测的一些方法

发布时间:2012-11-14

外源基因转化至受体后,需要翻译成蛋白质才能发挥作用。因此,通常转基因检测可以从进行DNA(脱氧核糖核酸)、mRNA(信使核糖核酸)、与蛋白质三个层次进行检测。
 
(1)DNA检测方法,DNA的检测是对外源基因是否已整合成功的鉴定,即转基因生物基因组中是否含有外源基因,方法有定性PCR、定量PCR、DNA测序、Southern以及近来快速发展的基因芯片。实际检测工作中,以DNA为基础的PCR检测方法得到了广泛应用。
 


(2)mRNA检测方法,mRNA检测是对外源基因表达进行转录水平的检测,方法有Northern杂交。它是用已知序列的DNA或RNA标记探针与mRNA序列互补成杂交双链,形成的杂交体通过探针的标记就可以检出。
 
(3)蛋白质检测方法,蛋白质检测是对外源基因表达进行翻译水平的检测,方法有生化酶反应、ELISA、Western杂交、生物学活性。生化酶反应:是利用报告基因的表达产物引起酶促生化反应,应用于报告基因已知的情况。Western杂交:是利用抗原-抗体特异结合原理检测外源基因表达产物特异蛋白质的生成,是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异蛋白质检测方法。生物学活性:直接将活体材料种植后观察其是否具备转入的性状。ELISA:该方法是引进酶标记及免疫学抗原-抗体技术进行检测,是常用方法之一,许多公司已商品化各种类型的转基因检测试剂盒。

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